Амунин

CRF был первоначально выделен и очищен из гипоталамуса овец Вейлом и другими учеными в 1981 году. Его аминокислотная последовательность:
H-Сер-Глн-Глу-Про-Про-Иле-Сер-Лей-Асп-Лей-Тр{{ 11}}Phe-Его-Leu-Leu-Arg-Glu-Val-Leu-Glu-Met{{21 }}Thr-Lys-Ala-Asp-Gln-Leu-Ala-Gln-Gln-Ala- Его-Сер-Асн-Арг-Лис-Лей-Лей-Асп-Иле-Ала-NH2
Эта последовательность содержит 41 аминокислоту с молекулярной массой примерно 4,7 кДа, с серином (Ser) на N--конце и амидированной модификацией аланина (Ala) на C--конце. Гомология аминокислот между CRF овцы и CRF человека составляет 95%, с различиями только в положениях 7, 10, 13, 16, 21, 23, 26, 28, 31, 34 и 38, но функции высоко консервативны.

Трифторацетат CRF (овечий) (номер CAS: 79804-71-0) представляет собой солевое соединение, образующееся путем объединения карбоксильного конца CRF с трифторуксусной кислотой (TFA). К преимуществам модификации TFA относятся:

Повышенная растворимость: Сильная кислотная группа (- COCF ∝) TFA может увеличивать растворимость пептидов в органических растворителях, облегчая экспериментальные операции.
Стабильная структура пептида: ТЖК уменьшает агрегацию и деградацию пептидов за счет образования солевых мостиков, продлевая период полу-периода полураспада.
Сохранение биологической активности: модифицированный CRF по-прежнему может эффективно связываться с рецептором CRF (CRFR), сохраняя функциональные характеристики природных молекул.

Трифторацетат CRF (овечий) обычно получают методом твердофазного пептидного синтеза (SPPS), где боковые цепи аминокислот защищены защитными группами Fmoc или Boc, постепенно соединяются с образованием линейной полипептидной цепи и, наконец, разрезаются смолой TFA и очищаются. Стандарты контроля качества включают в себя:

Чистота: высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ) определяет чистоту не менее 98%.
Проверка молекулярной массы: Масс-спектрометрия (МС) подтверждает, что молекулярная масса соответствует теоретическому значению.
Анализ биологической активности: проверьте его способность стимулировать секрецию адренокортикотропного гормона (АКТГ) посредством экспериментов на клетках in vitro (например, на клетках опухоли гипофиза AtT-20).

Рецептор CRF принадлежит к семейству рецепторов, связанных с белками B-класса G (GPCR), которое включает два подтипа: CRF ₁ R и CRF ₂ R.
CRF₁R: широко распространен в центральной нервной системе (например, в коре головного мозга, гиппокампе, миндалевидном теле) и периферических тканях (например, в гипофизе, надпочечниках, плаценте).
CRF₂R: в основном экспрессируется в паравентрикулярном ядре гипоталамуса, голубом пятне, спинном мозге и периферических тканях, таких как сердце, кровеносные сосуды и желудочно-кишечный тракт.
Гомология аминокислотных последовательностей между двумя рецепторами достигает 70%, но существуют различия в специфичности связывания лигандов: CRF ₁ R имеет более высокое сродство к CRF, чем CRF ₂ R, который имеет тенденцию связываться с лигандами семейства урокортина (UCN).

После связывания с рецептором CRF способствует активности аденилатциклазы (AC), активируя белок Gs, что приводит к увеличению внутриклеточных уровней аденозинмонофосфата (цАМФ), что, в свою очередь, активирует протеинкиназу А (PKA) и нижестоящие сигнальные молекулы, такие как CREB. Кроме того, CRF может активировать фосфолипазу C (PLC) через белок G q, вызывая мобилизацию ионов кальция (Ca ² ⁺) и активацию протеинкиназы C (PKC).
Ключевыми сигнальными узлами являются
Путь CAMP PKA: регулирует секрецию АКТГ, метаболизм глюкозы и экспрессию генов.
Путь Ca² ⁺ - PKC: участвует в регуляции возбудимости нейронов и синаптической пластичности.
Путь MAPK: опосредует долгосрочные-адаптационные реакции (например, выживание нейронов) посредством фосфорилирования ERK1/2.

Длительное воздействие CRF может привести к десенсибилизации рецепторов, что проявляется в снижении эффективности связывания G-белка и фосфорилирования рецепторов. Десенсибилизация CRF ₁ R в основном основана на эндоцитозе, опосредованном - аррестином, в то время как эффективность эндоцитоза CRF ₂ R относительно низкая, что может быть связано с различиями в субклеточной локализации рецепторов. После эндоцитоза рецепторы могут быть возвращены на клеточную мембрану или поступить в лизосомы для деградации, что имеет решающее значение для поддержания функционального гомеостаза рецепторов.